免疫熒光層析法又叫熒光免疫層析法，是一種結(jié)合了免疫層析技術(shù)與熒光標(biāo)記技術(shù)的快速檢測方法。

1、技術(shù)原理

熒光免疫層析法以硝酸纖維素膜為載體，通過毛細(xì)作用使待測樣本在層析條上移動。樣本中的目標(biāo)物與熒光標(biāo)記的抗體結(jié)合后，在檢測線處被固定抗體捕獲形成復(fù)合物，激發(fā)光照射后產(chǎn)生熒光信號。該技術(shù)利用抗原抗體特異性反應(yīng)實(shí)現(xiàn)定性或定量檢測，靈敏度高于傳統(tǒng)膠體金層析法。

2、標(biāo)記方式

常用熒光標(biāo)記物包括量子點(diǎn)、稀土熒光微球等納米材料。這些標(biāo)記物具有斯托克斯位移大、抗光漂白性強(qiáng)等特點(diǎn)，可通過便攜式熒光讀數(shù)儀實(shí)現(xiàn)信號量化。標(biāo)記抗體時需保持其生物活性，通常采用EDC/NHS活化羧基偶聯(lián)法。

3、應(yīng)用領(lǐng)域

該方法廣泛應(yīng)用于傳染病檢測如流感抗原篩查、妊娠檢測、心肌標(biāo)志物檢測等即時檢驗(yàn)場景。在新冠疫情期間，采用該技術(shù)的抗原檢測試劑盒因操作簡便、15分鐘內(nèi)出結(jié)果而被廣泛使用。

4、性能優(yōu)勢

相比膠體金法，其檢測靈敏度可提升10-100倍，檢測限可達(dá)pg/mL級別。內(nèi)置質(zhì)控線可驗(yàn)證檢測有效性，部分產(chǎn)品配合智能終端可實(shí)現(xiàn)結(jié)果數(shù)字化判讀，減少人為誤差。

5、操作流程

典型操作包括樣本加樣、層析反應(yīng)、信號讀取三步。檢測時需注意樣本量控制、環(huán)境溫度影響及結(jié)果判讀時間。部分高敏產(chǎn)品需要專用熒光分析儀進(jìn)行定量檢測。

使用熒光免疫層析試劑時應(yīng)注意檢查有效期，避免反復(fù)凍干標(biāo)記抗體。儲存時應(yīng)避光防潮，檢測前平衡至室溫。對于臨界值結(jié)果建議復(fù)檢或采用其他方法驗(yàn)證，特殊人群檢測需結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷。