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基因測序是什么原理？

患者：男，33歲 提問于2018-12-15 13:30

病情描述:
測取基因的順序用的是基因測序，它的原理是什么？
共2個回答
夏廷毅 主任醫(yī)師 去掛號
北京華信醫(yī)院 三級 放療科
DNA測序的方法有很多種，目前最常見的是雙脫氧終止法了。在測序用的緩沖液中含有四種dNTP及聚合酶，測序時分成四個反應(yīng)，每個反應(yīng)除上述成分外分別加入2,3-雙脫氧的A、C、G，T核苷三磷酸(稱為ddATP，ddCTP，ddGTP，ddTTP)，然后進行聚合反應(yīng)。在第一個反應(yīng)物中，ddATP會隨機地代替dATP參加反應(yīng)一旦ddATP加入了新合成的DNA鏈，由于其3位的羥基變成了氫，所以不能繼續(xù)延伸。所以第一個反應(yīng)中所產(chǎn)生的DNA鏈都是到A就終止了。同理第二個反應(yīng)產(chǎn)生的都是以C結(jié)尾的，第三個反應(yīng)的都以G結(jié)尾，第四個反應(yīng)的都以T結(jié)尾, 電泳后就可以讀出序列了。
張鞾 副主任醫(yī)師 去掛號
江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 三甲 腫瘤科
這個測序法，加了四種材料進去，ddT、ddA、ddG、ddC，能和原始的DNA序列配對，但因特殊的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致復(fù)制終止。測定過程中，將待測樣品分為4份，每份中加入一樣改變后的材料。結(jié)束后，第一份中所有片段全是以ddT為終端的不同長度的序列，以此類推形成了長度不同，可以分辨出長短不同的序列，然后在看看這個序列對應(yīng)的添加的材料是哪一種，就能按照序列的長短來確定相應(yīng)的脫氧核苷酸了。
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